新兴的微滴式数字PCR（droplet digital PCR，ddPCR）被认为是第3代核酸扩增技术，通过把稀释到一定浓度的DNA分子分布到10 000～20 000 个微滴中，使大部分微滴中DNA分子的数量为1或0，然后通过PCR扩增和阳性信号的累积读取阳性反应单元数，采集阳性信号与阴性信号的比例，再根据泊松分布计算出样本中的DNA分子数，从而实现对DNA分子的绝对定量。目前该技术在食品领域的应用日益增多，主要应用于食源性致病菌检测、转基因植物检测、动物源性成分检测等方面。国内鲜见ddPCR技术应用于婴幼儿配方食品中双歧杆菌检测的文献报道，针对现有检测方法的不足，本研究拟采用ddPCR检测技术建立针对婴幼儿配方食品中常见益生菌的快速准确定量方法，旨在为婴幼儿配方食品中益生菌的定量检测提供新的思路，为监管部门对益生菌婴幼儿配方乳粉实现有效监管提供有力的技术支撑。

配制ddPCR体系，体系为2×探针法ddPCR预混液10 µL，将引物稀释到10 µmol/L，取2.25 µL上下游引物和1.0 µL探针加入体系，加入2 µL的模板，最后用灭菌双蒸水补足20 µL。

将充分混匀的ddPCR体系转移到微滴发生卡中，并向微滴发生卡中加入70 µL微滴发生专用油，将微滴发生卡放到微滴发生器中进行反应。随后将生成的40 µL微滴液转移到ddPCR的96 孔板中，用封膜仪对96 孔板封膜，准备进行ddPCR。

ddPCR程序：95 ℃预变性10 min；94 ℃变性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，进行43 个循环；98 ℃固化微滴10 min。

ddPCR结束后将96 孔板放入QX200 Droplet Reader仪器中，依次录入样品信息，根据Quantasoft软件计算出最终结果（copies/20 µL）。