迈迪安的可风干植物直扩qPCR预混液(MDX116)是一种无甘油、抗抑性的预混液,专门为开发从植物样本中免核酸提取、进行DNA直扩的常温稳定型检测设计的一款qPCR试剂,适用于从植物裂解液中直接进行DNA扩增和对低量污染物的高灵敏度识别,具有多重检测中高度重现性的稳健扩增。
可风干植物直扩qPCR预混液是市面上shou款用于开发常温稳定的植物DNA直扩的产品。它结合了抗抑性和可风干的优势,为开发高灵敏度,低成本的植物检测提供了理想的解决方案。一小块植物叶片在SDS裂解液、碱性裂解液或水中加热裂解后直接加入风干的反应预混液中即可进行扩增反应,获得高灵敏度和可重复性的检测结果。
可风干植物qPCR预混液在干燥前后均能从使用不同裂解液的植物裂解样本中进行高效扩增:
将一片番茄叶穿孔样本分别加入 (A) 26 μL 0.1% SDS裂解液 和 (B) 碱性裂解液 (20 μL 0.2M NaOH +6 μL 2M Tris-HCl, pH 7.5)在95 °C加热5分钟裂解。分别使用干燥前后的可风干植物直扩qPCR预混液对含有5% 和25% 的植物裂解液直接进行扩增,检测番茄Hsp21基因,对比预混液干燥前后的扩增性能。
左图:使用SDS裂解液,棕色为湿液扩增曲线,橙色为使用干燥预混液的扩增曲线。
右图:使用碱性裂解液,绿色为湿液扩增曲线,橙色为使用干燥预混液的扩增曲线。
结果表明,可风干植物qPCR预混液在干燥前后均能从使用不同裂解液的植物裂解样本中进行高效扩增。
对低量污染物的高灵敏度识别:
在可风干植物直扩qPCR预混液中加入水稻ATPe引物和探针,然后将混合物进行风干。分别向40%的番茄叶碱性裂解液中加入1000拷贝(棕色)、100拷贝(橙色)、10拷贝(绿色)和1拷贝(蓝色)的水稻基因组DNA,然后用该样本复溶风干的反应混合物,直接进行qPCR扩增。结果显示,可风干植物直扩qPCR预混液zui低可以检测到番茄裂解液样本中1个拷贝的水稻ATPe ,并且达到100%的扩增。
重检测中高度重现性的稳健扩增:
将水稻ATPe基因(每反应100个拷贝)和qPCR提取内控DNA(MDX027)添加到25%的番茄叶碱性裂解液中,然后用来复溶干燥的可风干植物直扩qPCR预混液,对番茄Hsp21基因(棕色)、水稻ATPe(绿色)和qPCR提取内控DNA(橙色)直接进行扩增,每个样本均有12个重复。结果显示了可风干植物直扩qPCR预混液在多重反应中的高度重现性。
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