现货供应:TaKaRa反转录试剂盒PrimeScript™RT reagent Kit(RR037A)

2023-12-10

Takara是一家总部位于日本京都的生物医药企业,起源于1841年,正式创立于1925年。该公司主要从事研究试剂、科学仪器、保健食品以及基因和细胞治疗产品(CDMO)的研发和销售。

对于生命科学工作者来说,Takara应该不陌生,其提供的限制性内切酶和聚合酶是实验室中常用试剂。Takara也是世界上shou批提供生命科学科研用试剂以及商用PCR仪器和试剂的企业。

TaKaRa逆转录试剂盒是一种将RNA逆转录为cDNA的专用试剂。RNA的纯度可以影响cDNA的合成量,而制备RNA的关键就是要抑制细胞中的RNA裂解酶,并防止所用仪器和试剂中RNA裂解酶的污染。因此,在实验中必须采取以下措施:戴一次性干净手套;使用RNA操作专用实验台;在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA分解酶的污染。制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution(for Real Time PCR)将Total RNA或cDNA稀释至低浓度时也能够进行准确稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。

提取的Total RNA中常常混有基因组DNA,而基因组DNA可以直接作为PCR模板进行扩增,造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生,我们必须采取如下两种措施:1、引物设计时避免基因组DNA扩增;2、使用DNase I处理除去基因组DNA。

1、引物设计时避免基因组DNA扩增

我们可以利用基因组DNA具有外显子和内含子的结构,在引物设计上下工夫,使PCR反应时不能扩增基因组DNA。此时我们首先应确认目的基因的基因组结构,选择较长的内含子。然后,在这个内含子两侧的外显子上分别设计上、下游引物。Real Time PCR反应时通常扩增的目的DNA片段长度都比较短设置的条件也是适合短片段DNA的扩增,超过500bp就很难扩增了。所以,当内含子足够长时,基因组DNA来源的扩增就不能发生:当内含子较短时,基因组DNA来源的扩增可能发生,但基因组DNA来源的扩增产物比mRNA来源的扩增产物长,可通过分析融解曲线的方法加以区分。但是,此种方法不适合具有单个外显子的基因、或者不具有内含子的生物种以及基因组情报没被解析的生物种等,此时必须采取方法2解决。

2、使用DNase I处理除去基因组DNA

使用常规方法提取Total RNA后,再使用DNase I分解混入的基因组DNA,最后进行苯酚/氯仿抽提乙醇沉淀等纯化Total RNA。

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