琼脂糖核酸电泳,选择紫外还是蓝光?

2023-12-10

DNA分子是一种自身不会发出荧光的大分子,需要相应的核酸分子染料结合到DNA分子的大沟处,通过激发光激发DNA –核酸染料复合物,复合物会发出一束强荧光,通过相应的滤光片过滤得到单波长的发射光,通过照相机或者肉眼捕获就能够检测到相应的DNA分子。那么琼脂糖核酸电泳要选择紫外还是蓝光呢?让我们一起来看看吧!

从核酸电泳发展至今,绝大多数的分子生物学实验室选择溴化乙锭(EtBr,也简称EB)作为核酸分子染料,由于EB的光谱特性,又不得不选择紫外光作为激发光。EB分子因其分子量较小,容易透过细胞膜,因此是一种致癌性ji强的有机小分子。而紫外光(UV)照射也会诱发基因突变,不仅会引发实验样品的基因突变,也会对实验人员造成一定的伤害。

为了解决EB分子的致癌问题,科研工作者通过有机合成技术将两个EB分子通过有机分子链连在了一起,解决了EB分子因分子量比较小容易通过细胞膜的问题,连在一起的分子被称为GelRed。这虽然解决了染料相对安全的问题,可激发光依然是UV,不能够从本质上解决对实验样品和实验操作者自身的安全问题。

事实上,除了EB和GelRed这两种以UV为激发光的核酸分子染料,还存在另一类核酸分子染料,如:GelGreen、SYBR Green、SYBR Gold、LED Green、SYBR Safe、GoldView等以480nm蓝光为激发光的核酸染料,这类染料分子量相对较大,细胞膜通透性较差,因此对实验人员带来的危害较小,相对EB分子是一种较安全的核酸分子染料。

由于波长470nm蓝光属于可见光,不会对实验样品造成破坏,也不会对实验人员造成危害,因此470nm的蓝光搭配安全核酸分子染料能够zui大程度降低核酸琼脂糖凝胶电泳带来的潜在危险。

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