什么是文库构建?

2023-12-10

基于NGS测序的诸多优点,故此技术在全球测序市场上占有着绝对的优势位置,而新一代测序(NGS)文库制备是一体化测序流程中的一个关键因素,那么什么是文库构建呢?让我们一起来看看吧!

基因文库是储存了某种生物的DNA片段的受体菌的集合体。文库分为储存全部DNA片段和部分DNA片段,前者叫基因组文库,后者包括cDNA文库。

文库构建的基础是将目标RNA或DNA制备成可以和测序仪器兼容的形式。从组织或者细胞中将DNA或RNA提取出来,并通过机械破碎或者是酶切法对其进行片段化。如果前面提取的是RNA样本,则需要将RNA逆转录为cDNA。对DNA进行接头的连接后,一般还会有一个文库的扩增,即通过PCR来对所需的目的片段进行扩增,然后进行上机测序。

传统的DNA文库构建包括:DNA片段化(超声法)、末端修复、加A、接头连接和PCR文库扩增等过程(Figure 1)。整个实验对DNA起始量、仪器有一定的要求。

新型的文库构建方法利用转座酶的转座原理,对DNA进行片段化并同时加上部分接头序列,是建库过程中是一个重大的进步。

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