蛋白质纯化都有哪些方法?

2023-12-10

蛋白纯化是指通过基因工程技术将编码蛋白的核酸序列导入到宿主细胞,使其大量表达,再使用适当的纯化方法将其在体外纯化出来,从而获得高纯度、活性和产量的蛋白质。那么蛋白质纯化方法都有什么呢?让我们一起来看看吧!

一、凝胶过滤层析:

根据分子大小从混合物中分离蛋白质,不同蛋白的形状及分子大小存在差异,在混合物通过含有填充颗粒的凝胶过滤层析柱时,由于各种蛋白的分子大小不同,扩散进入特定大小孔径颗粒内的能力也各异,大的蛋白分子会被先洗脱出来,分子越小越晚洗脱。

二、离子交换层析:

依据蛋白表面所带电荷量不同进行蛋白分离纯化,蛋白表面通常会均匀带有一定的电荷,在一定条件下可以与阳/阴离子交换柱结合。在改变pH或者用逐渐增加离子强度的缓冲液洗脱时,结合的物质可与洗脱液中的离子发生交换而被洗脱到溶液中。由于不同物质的电荷不同,与离子交换柱的结合能力也不同,所以被洗脱到溶液中的顺序也不同。

三、疏水作用层析:

利用蛋白质的疏水性,蛋白经变性处理或处于高盐环境下疏水残基会暴露于蛋白表面,不同蛋白疏水残基与固定相的疏水性配体之间的作用强弱不同,依次用从高至低离子强度洗脱液可将疏水用作由弱至强的组分分离。

四、亲和层析:

把待纯化的某一蛋白质(或在蛋白质上加上标签)的特异配体通过适当的化学方法共价连接到载体分子上,当蛋白质混合物加到填有亲和介质的层析柱时,待纯化的蛋白质与配体特异性结合,而其他蛋白质则不被结合,通过洗涤除去,被特异结合的蛋白质可以用含游离的相应配体溶液洗脱下来。

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