Lipo3000细胞转染的实验步骤及注意事项

2023-12-10

细胞转染常用的转染试剂很多,其中,Lipo3000深受广大科研工作者的喜爱,那我们来看看Lipo3000细胞转染的实验步骤及注意事项吧!

一、实验前准备

Lipofectamine™ 3000转染试剂(Thermo Fisher)、Opti-MEM(可以用无血清的培养基代替)

二、实验步骤

1.接种细胞,使其在转染时达到70–90%汇合度。

注:对于HEK293,6孔板一般铺50万个细胞左右。对于PC9, 24孔板一般铺5-10万个细胞。由于不同细胞,生长状况不太一样,需要根据情况调整。

2.使用Opti-MEM™培养基稀释Lipofectamine™ 3000试 剂,充分混匀。

3.使用Opti-MEM™培养基稀释DNA,制备DNA预混液,然后添加P3000™试剂,充分混匀。

4.将上面两步溶液合在一起,混匀并孵育10-15mins。

5.将混匀后的溶液加入到细胞培养基中,并轻轻摇晃培养基,使其均匀。

6.37°C孵育细胞2–4天,然后分析转染细胞。

转染量:

组分

96孔

24孔

6孔

DNA/孔

100ng

500ng

2500ng

P3000TM/孔

0.2μL

1μL

5μL

Lipofectamine™ 3000/孔

0.15和0.3μL

0.75和1.5μL

3.75和7.5μL

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