一、GoldBio荧光素原液（GLSS）的制备

1.在分子生物学级H2O中制备15 mg/mL（100X）GLSS。

a.为了获得最佳结果，应立即使用GLSS，但可能会将其分离分成小份，在-80°C下储存长达1个月。

2.萤光素酶发光中萤光素底物GLSS的最终浓度

含量测定应为：150μg/ml（荧光素-K为471μM，荧光素Na为468μM）。

二、GoldBio萤光素酶测定缓冲液（TMCA）的制备

在合并到TMCA中之前，将所有试剂作为分子级H2O中的储备溶液进行制备。

1.准备一份500mM的MgCl2（100x）溶液。

a.称取476.05 mg（95.21 g/mol）MgCl2并溶解在10 ml H2O中。

b.溶液可储存在RT。

2.制备25mM CoA（100x）溶液。

a.称取191.88 mg（767.53 g/mol）CoA并溶解在10 ml H2O中。

b.通过过滤器抽取5-10 ml H2O，制备0.2µm过滤器。

c.通过预湿过滤器对100x CoA进行灭菌，并在-20°c下储存。

3.制备15mM ATP（100x）溶液。

a.称取82.67 mg（551.14 g/mol）ATP并溶解在10 ml H2O中。

b.在-20°C下储存。

4.制备400mM Tris-HCl，pH 7.8（4x）缓冲液。

a.称取4.85 g（121.14 g/mol）Tris碱并溶解在85 ml H2O中。

b.用1M HCl调节pH至pH 7.8，并用H2O将体积调至100 ml。

5.在室温下准备新鲜的2倍TMCA原料。

a.计算实验所需的TMCA；将所有组件合并为2倍

工作浓度（在H2O中）（随后在荧光素酶测定中降低到1x）。

示例：对于1 ml TMCA（2x）：500µl Tris-HCl（4x原液）20µl MgCl2（100倍库存）20µl CoA（100倍库存）

20µl ATP（100倍库存）用H2O将体积调至1 ml。

b.如有必要，您可以在此时加入其他成分（即DTT、EDTA）。

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