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生物分子的分离模式选择方法-YMC代理

2025-09-29

各分离模式的特点及用途

针对核酸、多肽、蛋白质的分离，YMC拥有离子交换、体积排阻、疏水层析和反相四种模式的产品线。对电荷异质体等不同电荷状态的成分可使用离子交换进行分离。对于疏水性存在差异的生物分子，疏水层析色谱可在维持其活性状态下将其分离。对肽图等特性解析，反相模式最为适合。对存在明显分子量差异的抗体及其凝聚体与片段的分离等，体积排阻会是最佳选择。根据分离的用途和目的，选择适合的分离模式，可迅速进行方法开发。

模式	离子交换	体积排阻	疏水层析	反相
对应产品	BioPro IEX系列	YMC-SEC MAB YMC-Pack Diol	BioPro HIC HT	YMC-Triart (生物液相用)
分离原理	电荷	分子大小	疏水性	疏水性
适用分子量	数百万以内	约100万为止	数百万为止	约15万为止
分离能	+++	++	+++	+++
速度	++ ～ +++	+	+++	+++
样品上样量	+++	++	+++	++
样品稳定性	+++	+++	+++	+ ～ ++
用途	电荷异质体分析	凝聚体分析片段分析	抗体偶联药物的药物偶联比分析	肽图LC-MS 构造解析

生物色谱用色谱柱的选择方法

各分离模式的机理和分离案例离子交换色谱

在离子交换中，利用各化合物间的电荷差异进行样品的分离。固定相使用具有带电基团的阴离子交换担体和阳离子交换担体，流动相使用缓冲液中添加反离子对的试剂。通过离子交换作用，样品结合于固定相表面，之后随流动相中反离子对浓度的升高，样品结合力变弱，进而从总电荷小的样品开始依次洗脱流出。

关于蛋白质的电荷异质体分析一般使用离子交换色谱。下图为使用阳离子交换柱BioPro IEX SF采用pH梯度洗脱模式和缓冲盐梯度洗脱模式对4种单抗进行的分析案例，从结果中可以看到无论哪种模式都可获得尖锐的峰形且实现了电荷异质体中众多色谱峰及异构体的分离。

1. natalizumab

2. cetuximab

3. adalimumab

4. denosumab

Column	BioPro IEX SF (5 μm), 100 X 4.6 mmI.D.
Eluent	A) CX-1 pH Gradient Buffer A* (pH 5.6) B) CX-1 pH Gradient Buffer B* (pH 10.2) 0-100%B (0-20 min)
Flow rate	0.6 mL/min

*Purchased Thermo Fisher Scientific Inc.

Column	BioPro IEX SF (5 μm), 100 X 4.6 mmI.D.
Eluent	A) 10 mM MES-NaOH (pH 5.7) B) 10 mM MES-NaOH (pH 5.7) containing 1 M NaCl 0-20%B (0-20 min)
Flow rate	0.6 mL/min

用阳离子交换色谱柱进行的单克隆抗体高效分析

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