原代人肝细胞转染质粒

2023-04-21

转染步骤:

1、质粒提取:使用无内毒素提取试剂盒

2、质粒溶解:溶于超纯水或双蒸水,一定不能溶于试剂盒Buffer等其他试剂

3、质粒荧光:若质粒不带荧光、请使用荧光对照,方便查看转染效率

4、质粒浓度:500-600ng/ul

5、质粒和转染试剂复合物制备:质粒8ug和转染试剂8ul,吹打混匀室温静置15分钟,无需也不能另外加入任何试剂稀释

6、细胞转染前状态:拍照片留存

7、贴壁细胞铺板:6孔板完全培养基2ml、培养基中不加双抗,细胞密度:60%左右(不同细胞,按48小时生长到90%,往前推算细胞铺板密度)

8、转染:将复合物加入轻摇混匀、培养箱培养

9、换液:转染24小时后培养基换液

10、转染效率:转染48小时后拍荧光照片,查看转染效率

11、转染后细胞状态:拍明场细胞状态照片

12、检测:总计转染48小时后提取RNA或蛋白检测


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