Phos-tag™是一种可特异性捕获磷酸化Ser、Thr、Tyr等物质的功能分子，由日本广岛大学医齿药学综合研究科医学品分子机能科学研究室开发。以Phos-tag™ 丙烯酰胺（Phos-tag™ Acrylamide）为首开发的多种Phos-tag™ 产品被应用于世界范围内的基础研究，并且在GPCR通路及Wnt通路的信号转导分析方面也取得了优秀成果。

在制备SDS-PAGE预制胶过程中加入Phos-tag™ Acrylamide，即可根据磷酸化水平和磷酸化位点分离磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。

原理：

1. 电泳中的磷酸化蛋白捕获2个二价金属离子。

2. 磷酸化水平越高电泳速度越慢。

3. 根据磷酸化水平进行分离。（即使磷酸化位点的数目相同，但只要位置不同就能分离）

实验数据

①α-casein去磷酸化反应随时间的变化

使用碱性磷酸酶随时间（孵育时间：0-120 min）处理α-casein，并使用Phos-tag™ SDS-PAGE和常规SDS-PAGE分离去磷酸化处理的样品。

②野生型/突变型Noxa表达的MCL-1磷酸化水平变化

③二维电泳中的应用：hnRNP K异构体的磷酸化分析

通过免疫沉淀法，从经LPS刺激后的小鼠巨噬细胞J774.1的细胞核提取液中，分离得到hnRNP K。在二维电泳中，一维使用IPG胶（pH 4.7-5.9），二维使用Phos-tag™ SDS-PAGE，分离hnRNP K的异构体（66 kDa，64 kDa）。使用质谱仪可以确认不同的点代表不同的异构体或修饰位点。

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