在动物细胞培养过程中，必须有可以贴附的支持物表面，其依靠自身分泌或培养基中的贴附因子才能在该表面生长增殖的离体动物的培养细胞。那么贴壁细胞培养的步骤有那些呢？让我们一起来看看吧！

1. 将含有冻存细胞的安瓿放入37℃水浴中解冻。

2. 用70%乙醇对安瓿的顶端进行消毒，打开安瓿，用吸管将细胞转移到含有5ml起始培养基的25cm2组织培养瓶中，轻轻摇动培养瓶，使细胞均匀分布于培养瓶中，将其放入5%CO2加湿培养箱中37℃培养过夜。

3. 吸出起始培养基，换成适当的维持培养基。将细胞放回CO2培养箱37℃培养，每天检查细胞是否生长至汇片。

4. 如果细胞生长至汇片，吸出培养基。

5. 用PBS或胰酶/EDTA清洗细胞，除去细胞上残留的血清，将洗液吸出。

6. 用37℃、适当体积的胰酶/EDTA刚好覆盖单层细胞（如对于25cm2培养瓶需要0.3ml）。消化30～40s（细胞应该分开），晃动培养瓶使细胞wan全分开。

7. 加入1.4ml适当的维持培养基，用吸管来回吹打细胞悬液多次以打散细胞团（这些细胞用于传代）。

8. 吸出0.5mL的细胞悬液，将其加入到新的含有30ml维持培养基的组织培养瓶中。轻轻摇动培养瓶，使细胞均匀分布于培养瓶中，将其放入CO2培养箱中37℃培养直到细胞生长至汇片（大约1周）。大约间隔一周用维持培养基进行1:20稀释传代以维持细胞生长。

更多有关贴壁细胞的培养步骤，请联系金山科研平台：微信jinshanbio